Биосинтез белков
 
Данилевский в 1891 г. предположил, что основные формы связи аминокислот в сложной молекуле белка это амидные связи, образованные карбоксилом одной молекулы аминокислоты и аминогруппой другой (поликонденсация типа “голова – хвост”).
Примером может послужить данная формула:
-H ₂ O
H2N-CH2-C=O +HNHCH2COOH--а
\
OH
а H2N-CH2-CO-NH-CH2-COOH
(пептидная связь)
Данная связь и подобные ей называются пептидными связями.
Пептиды или полипептиды — это низкомолекулярные соединения, в которых аминокислоты соединены друг с другом пептидными связями.
Пептиды образуются при частичном гидролизе белков. Э. Фишер и Гофмейстер развили теорию о пептидном строении белка. В данное время эта теория полностью подтверждена.
В зависимости от числа аминокислотных остатков, входящих в молекулу полипептида, различают дипептиды, трипептиды, тетрапептиды и т. д. . Характерную для пептидов группировку
-CO-NH- называют пептидной.
Названия полипептидов производят от названий остатков аминокислот, прореагировавших своими карбоксильными группами, и от названия аминокислоты, реагирующей своей аминогруппой и сохраняющей свободную карбоксильную группу:
H2N-CH2-CO-NH-CH(CH3)-COOH
глицилаланин(H-гли-ала-OH)
NH2-CH(CH3)-CO-NH-NH2-CO-NH-CH2-COOH
Аланилглицилглицин(H-ала-гли-гли-OH)
К настоящему времени разработано много методов превращения а-аминокислот в пептиды и синтезированы простейшие природные белки –инсулин, рибонуклеаза, вазопрессин, окситоцин и др.
Для того чтобы соединить две аминокислоты пептидной связью, необходимо: а) закрыть (защитить) карбоксильную группу глицина и аминогруппу аланина, чтобы не произошло нежелательных реакций по этим группам; б) образовать пептидную связь; в) снять защитные группы. Защитные группы должны надёжно закрывать аминную и карбоксильную группы в процессе синтеза и потом легко сниматься без разрушения пептидной связи.
Защита аминогруппы наиболее просто проводится ацилированием:
-HCl
R-COCl+H2N-CH-COOH--а R-CO-NH-CH-COOH
| |
CH2 CH3
Карбоксильную группу для защиты превращают в сложноэфирную:
-HOH
H2N-CH2-COOH+HOR--а H2N-CH2-COOR
Для того чтобы образовалась пептидная связь надо активировать карбоксильную группу N-ацилаланина, превращая его в хлорангидрид, или проводят конденсацию в присутствии сильных водоотнимающих веществ (дициклогексилкарбодиимид, этоксиацетилен):
-H ₂ O
R-CO-NH-CH-COOH+HNHCH2-COOR--а
|
CH3 гидролиз
а R-CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOR----а
|
CH3
а H2N-CH-CO-NH-CH2-COOH
|
CH3
Далее необходимо снять защитные группы в таких условиях, чтобы не затрагивалась пептидная связь. Данным способом можно синтезировать не только ди-, но и три-, и тетрапептиды и т. д. .
В 1960 г. Мерифильд открыл достаточно интересный и перспективный метод синтеза пептидных связей.
В дальнейшем этот метод получил название твёрдофазного синтеза пептидов. Первая аминокислота с защищённой аминогруппой присоединяется к твёрдому носителю – ионнообменной смоле, содержащей первоначально группы –CH2Cl (1-ая стадия), при этом образуется “яркая” связь: (1)-NaCl
Смола-CH2Cl+NaOOC-CHR-NHCOR’а Смола- -CH2O-C-CHR-NHCOR’а Смола-CH2O-C-CHR-
|| ||
O O
+HOOC-CHR’’-NHOR(3)
-NH2-----------а Смола-CH2O-C-CHR-
||
(4) O
-NHCO-CHR’’-NHCOR’а Смола-CH2O-C-CHR--NHCO-CHR’’-NH2 и т. д. ||
O
Далее наращивают пептидную цепь, это делается с помощью пропускания через смолу растворы соответствующих реагентов. Для этого в начале надо убрать группу, защищающую конечную NH2 – группу (2-ая стадия). Пропуская через смолу раствор другой аминокислоты с защищённой аминогруппой в присутствии водоотнимающих реагентов, образуют пептидную связь между первой и второй аминокислотой (3-я стадия). Если затем убрать защитную группу (4-ая стадия), синтез пептида можно вести далее.
Далее, после наращивания пептидной цепи до нужной величины гидролизуют “якорную” сложноэфирную связь и смывают полипептид со смолы:
HBr
Смола-CH2O-CO-CHR-NH…CO-CHR’NH2---а
а Смола-CH2OH+HOOCCHRNH…COCHR’NH2
Полипептид
Автоматизировать процесс не составляет не какого труда, ведь метод Мерифильда прост в техническом оформлении. Метод Мерифильда позволяет значительно сократить затраты труда и времени на синтез белков.
Не смотря даже на то что, белки инсулин (51 аминокислота) и рибонуклеаза (124 аминокислоты) были синтезированы классическими методами. Мерифильду удалось синтезировать рабонуклеозу менее чем за месяц, не смотря на то, что надо было произвести 369 последовательных реакций.